所以根据亚硫酸氢盐处理过的DNA模板设计引物时，先输入感兴趣的DNA序列，程序会显示两种序列:一种是输入的源DNA序列；另一个是硫化后的DNA序列。除了CpG岛上的5甲基胞嘧啶(5mC)外，所有未甲基化的“C”都转化为“T”。根据转化的序列，设计引物进行BSP和MSP。1.MSP:DNA用亚硫酸氢钠处理后，所有未甲基化的胞嘧啶脱氨基，变成尿嘧啶，但甲基化的胞嘧啶没有。
5、RNA的提取方法步骤及 原理.总RNA的提取方法:目前常用的方法是用异硫氰酸胍酚提取。Trizol试剂是目前应用最广泛的提取RNA的专用试剂，主要由苯酚和异硫氰酸胍组成。它能迅速破坏细胞结构，释放存在于细胞质和细胞核中的RNA，将核糖体蛋白从RNA分子中分离出来，保证RNA的完整性。提取步骤:首先用液氮研磨物料，匀浆，加入Trizol试剂进一步破碎细胞，溶解细胞成分。
它用于mRNA的下一步纯化。含有RNA样品的细胞裂解物也可以通过硅胶膜纯化柱纯化。RNA浓度和纯度的判断:OD260为1时，相当于50ug/mL的浓度；OD260/0D280值在1.8-2.0之间，说明纯度好；0D260/OD280值低于1.8，样品被蛋白质或苯酚污染；0D260/0D280值大于2.0，提取的RNA可能会降解。电泳后，如果rRNA大小完整，且28SrRNA和18SrRNA的亮度接近2:1，mRNA分布均匀，则考虑RNA。
6、RNApulldown 原理与操作步骤原理:RNA下拉它的目的是检测与RNA相互作用的蛋白质。实验过程简单来说就是将感兴趣的RNA在体外转录并标记(如生物素标记)，然后与细胞裂解液孵育，形成RNA蛋白复合物，然后分离蛋白，用WB或质谱验证或鉴定。实验步骤:1体外转录模板的制备1。设计用于扩增靶基因引物，具有如下表的T7启动子序列(表中红色部分为T7启动子序列):基因名称引物名称引物序列gapdhsensefaaaatactactactagggttgccatgacccttrctcacgattactaggantisentgttg。ccatcatgacccttraaatacactatagggctaccgactactcaggccg 2。构建目的基因载体，用含T7启动子序列的引物扩增，回收琼脂糖凝胶。
7、westernblotting的过程和 原理什么理论过程？那就是原理白？WesternBlot 原理，显色分类及操作步骤1，原理与Southern或Northern杂交法相似，但WesternBlot采用聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测对象为蛋白质，“探针”为抗体，“显色”采用标记的二抗。将PAGE分离的蛋白质样品转移到固相载体(如硝酸纤维素膜)上，固相载体以非共价键的形式吸附蛋白质，电泳分离的多肽种类和生物活性可保持不变。
8、wb实验的 原理和步骤WB实验是用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)分离混合蛋白样品，然后用专门的虹吸管或电场装置将其印迹在固体介质(如PVDF膜)上，再用固体载体上的蛋白质或多肽作为抗原。与相应的第一抗体特异性结合，然后与酶或同位素标记的第二抗体结合，最后通过底物显色或放射自显影检测特定目的基因表达的蛋白质组分。蛋白质样品制备的原始样品可以是细胞、组织、培养上清液、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白质。以下是定性检测目的蛋白时细胞样品的处理方法，其余样品制备方法参考相关文献。
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2.丢弃培养基，用1XPBS冲洗细胞两次，并去除残留的培养基。3.加入1XSDS样品缓冲液，刮去细胞并转移至Ep管。注意:在冰上操作。4.超声波切割DNA 10 ~ 15秒，以降低样品的粘度。5.将样品煮沸5分钟。6.12000g离心5min，取上清液。SDSPAGE电泳1。清洁玻璃板2。灌胶和装胶1。玻璃板对齐后，放入夹具中夹紧。然后垂直贴在架子上准备倒胶。
9、coip实验 原理1，coip原理:coip(共沉淀)是一种基于抗体与抗原特异性相互作用研究蛋白质相互作用的经典方法，是确定全细胞内两种蛋白质内源性相互作用的有效技术；作为一种免疫沉淀技术，常被用于鉴定特定蛋白质复合物中未知的蛋白质成分。免疫共沉淀的设计理念是，如果一个已知的蛋白质是一个大的蛋白质复合物中的一员，那么就有可能利用这个蛋白质的特异性抗体和能与抗体结合的proteinA/G小珠，从溶液中“下拉”出整个蛋白质复合物，从而达到富集蛋白质复合物的目的；然后通过质谱鉴定这个蛋白复合物的其他未知成员或者通过WB验证已知蛋白是否与预测蛋白结合。
